### 实验步骤

#### 一、过夜培养

1. 将5ml预热的液体培养基转移至一支无菌的16mm或18mm的试管中。

2. 使用接种环挑取一个单个菌落，浸入培养液中，并轻轻振动接种环，以便将待接种的细菌均匀分散在培养液中。

3. 盖好试管，置于摇床或转鼓式培养装置中，以60r/min的速度在37°C下培养至饱和（细胞浓度为1X10⁹~2X10⁹细胞/ml，培养时间为6小时）。

#### 二、大体积培养

1. 在一只无菌的Erlenmeyer瓶或baffle瓶中，使用新鲜预热的培养液，以1:100的比例稀释过夜培养物，烧瓶的体积应大于培养液体积的5倍。如果不进行摇动培养，则烧瓶体积应比培养液体积大20倍以上，以确保良好的通气。

2. 在37°C下进行剧烈摇动培养，速度约为300r/min。

#### 三、利用计数板监测生长情况

1. 使用一片干净的盖玻片覆盖在计数板上（或血球计数板）。

2. 小心地在盖玻片边缘滴上一小滴培养液，使其扩散至盖玻片下方。

3. 在相差显微镜下以400倍放大观察，并根据观察到的小方块中的细菌数量计算浓度，约为2X10⁷细胞/ml。

#### 四、利用分光光度计监测生长情况

由于仪器之间存在差异，分光光度计应使用已知浓度的培养液进行校准。

1. 测量OD600。为确保读数准确，需要将培养液稀释至OD600＜1。

2. 根据每增加0.1的OD值，大约相当于108细胞/ml来计算细菌的浓度。

在这一系列实验步骤中，尊龙凯时提供了高品质的实验器材与相关耗材，助力科研工作者在生命科学领域取得更卓越的成果。