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尊龙凯时液体培养基细菌培养实验步骤

发布时间:2025-02-24   信息来源:尊龙凯时官方编辑

### 实验步骤

尊龙凯时液体培养基细菌培养实验步骤

#### 一、过夜培养

1. 将5ml预热的液体培养基转移至一支无菌的16mm或18mm的试管中。

2. 使用接种环挑取一个单个菌落,浸入培养液中,并轻轻振动接种环,以便将待接种的细菌均匀分散在培养液中。

3. 盖好试管,置于摇床或转鼓式培养装置中,以60r/min的速度在37°C下培养至饱和(细胞浓度为1X109~2X109细胞/ml,培养时间为6小时)。

#### 二、大体积培养

1. 在一只无菌的Erlenmeyer瓶或baffle瓶中,使用新鲜预热的培养液,以1:100的比例稀释过夜培养物,烧瓶的体积应大于培养液体积的5倍。如果不进行摇动培养,则烧瓶体积应比培养液体积大20倍以上,以确保良好的通气。

2. 在37°C下进行剧烈摇动培养,速度约为300r/min。

#### 三、利用计数板监测生长情况

1. 使用一片干净的盖玻片覆盖在计数板上(或血球计数板)。

2. 小心地在盖玻片边缘滴上一小滴培养液,使其扩散至盖玻片下方。

3. 在相差显微镜下以400倍放大观察,并根据观察到的小方块中的细菌数量计算浓度,约为2X107细胞/ml。

#### 四、利用分光光度计监测生长情况

由于仪器之间存在差异,分光光度计应使用已知浓度的培养液进行校准。

1. 测量OD600。为确保读数准确,需要将培养液稀释至OD600<1。

2. 根据每增加0.1的OD值,大约相当于108细胞/ml来计算细菌的浓度。

在这一系列实验步骤中,尊龙凯时提供了高品质的实验器材与相关耗材,助力科研工作者在生命科学领域取得更卓越的成果。