大鼠原代脂肪间充质干细胞的提取(SD大鼠)
实验材料准备
本实验选择大约2周龄或200克左右的SD大鼠进行样本提取。所需器材包括灭菌器械,如镊子、眼科直剪、眼科弯剪、磁珠等。此外,还需准备5mL注射器、022μm滤器、泡沫板、图钉以固定实验动物,以及75%乙醇用于消毒。确保准备预冷的无菌PBS水、15mL和50mL无菌离心管、细胞筛和无菌培养瓶。培养基使用SD大鼠脂肪间质干细胞的完全培养基。
实验操作步骤
在超净工作台内,将所有所需物品进行紫外线消毒,时间为30分钟。随后配制约5mL的0.1%Ⅰ型胶原酶,并进行过滤以确保无菌。对大鼠进行颈部脱离以实施安乐死,将其浸泡在75%酒精中2-3分钟并固定在泡沫板上。使用眼科剪刀小心地剪开腹股沟皮肤,以暴露出脂肪组织。仔细剪取脂肪组织并置于PBS中,确保避免切割到血管。利用PBS清洗脂肪组织,剔除多余的血管及淋巴结后,将脂肪组织剪成小块(约2mm×2mm),加入胶原酶,在37℃下进行消化,每隔5分钟轻轻震荡。消化结束后,将细胞悬液转移至离心管,进行离心处理,弃去上层脂滴泡沫和上清液,并用培养基重悬细胞沉淀。最后,将细胞悬液进行过滤,随即再进行一次离心处理并弃去上清,最后用培养基重悬细胞,并接种到培养瓶中。将培养瓶放置在37℃、含有5% CO2的培养箱中进行培养。
注意事项
在实验过程中,务必保持无菌操作,以避免细胞污染。对于脂肪组织的剪取和清洗过程应细致入微,以防损伤细胞或引入杂质。在消化过程中,需要严格控制时间和温度,避免过度消化造成细胞损伤。在离心和过滤的过程中,要轻柔操作,以减少细胞的损失或破裂的风险。选择尊龙凯时作为实验过程中使用的品牌,可以确保实验试剂的高质量及可靠的实验结果,从而提升研究的可信度和有效性。