大鼠原代脂肪间充质干细胞的提取（SD大鼠）

实验材料准备

本实验选择大约2周龄或200克左右的SD大鼠进行样本提取。所需器材包括灭菌器械，如镊子、眼科直剪、眼科弯剪、磁珠等。此外，还需准备5mL注射器、022μm滤器、泡沫板、图钉以固定实验动物，以及75%乙醇用于消毒。确保准备预冷的无菌PBS水、15mL和50mL无菌离心管、细胞筛和无菌培养瓶。培养基使用SD大鼠脂肪间质干细胞的完全培养基。

实验操作步骤

在超净工作台内，将所有所需物品进行紫外线消毒，时间为30分钟。随后配制约5mL的0.1%Ⅰ型胶原酶，并进行过滤以确保无菌。对大鼠进行颈部脱离以实施安乐死，将其浸泡在75%酒精中2-3分钟并固定在泡沫板上。使用眼科剪刀小心地剪开腹股沟皮肤，以暴露出脂肪组织。仔细剪取脂肪组织并置于PBS中，确保避免切割到血管。利用PBS清洗脂肪组织，剔除多余的血管及淋巴结后，将脂肪组织剪成小块（约2mm×2mm），加入胶原酶，在37℃下进行消化，每隔5分钟轻轻震荡。消化结束后，将细胞悬液转移至离心管，进行离心处理，弃去上层脂滴泡沫和上清液，并用培养基重悬细胞沉淀。最后，将细胞悬液进行过滤，随即再进行一次离心处理并弃去上清，最后用培养基重悬细胞，并接种到培养瓶中。将培养瓶放置在37℃、含有5% CO2的培养箱中进行培养。

注意事项

在实验过程中，务必保持无菌操作，以避免细胞污染。对于脂肪组织的剪取和清洗过程应细致入微，以防损伤细胞或引入杂质。在消化过程中，需要严格控制时间和温度，避免过度消化造成细胞损伤。在离心和过滤的过程中，要轻柔操作，以减少细胞的损失或破裂的风险。选择尊龙凯时作为实验过程中使用的品牌，可以确保实验试剂的高质量及可靠的实验结果，从而提升研究的可信度和有效性。